MTT檢測細胞增殖情況
一、實驗原理
MTT法又稱MTT比色法，是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚（Formazan）并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲瓚，用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其吸光度值，可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用于生物活性因子的活性檢測、抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟、快捷。
二、主要材料
· 細胞生長培養(yǎng)基
· 胰蛋白酶
· 胎牛血清
· PBS
· 青霉素-鏈霉素溶液（100X）
· MTT試劑
· DMSO
三、主要試劑配制
細胞生長培養(yǎng)液：-20℃保存，臨用前按體積比配成含10% FBS和1%青霉素-鏈霉素雙抗的完全培養(yǎng)液。
抗菌素溶液：青霉素-鏈霉素溶液（100X）加入培養(yǎng)基中100倍稀釋。
PBS磷酸鹽緩沖液：PBS粉劑用ddH2O定容至1000 ml，調pH7.2，121℃、30min高壓滅菌，4℃保存?zhèn)溆谩?/div>
5mg/ml MTT溶液：稱取MTT 0.5g，溶于100 ml磷酸鹽緩沖液（PBS）或無酚紅培養(yǎng)基中，用0.22μm濾膜過濾除菌，4℃避光保存即可。
四、實驗步驟
1.取經不同處理的細胞，計數調整細胞濃度至1×105/ml。
2.分別接種于96孔板中，每孔100 μl，每組細胞設3~5個復孔
3.將96孔板移入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細胞培養(yǎng)到適當時間
4.每孔加入10μl 5mg/ml MTT溶液（注意不能產生氣泡），在培養(yǎng)箱內孵育4~6h。
5. 4~6h后終止培養(yǎng)，小心吸去孔內培養(yǎng)液。
6.每孔加入150ul DMSO，置搖床上低速振蕩10min，使結晶產物充分溶解。在酶聯免疫檢測儀檢測490nm處各孔吸光度值。
7.同時設置調零孔（培養(yǎng)基、MTT、DMSO），對照孔（未經處理的細胞、培養(yǎng)基、MTT、DMSO）。
五、實驗結果
